был использован хлористоводородный кокаин.
В таблице приведены данные анализа гашиша 6 различных образцов в процентах от веса сухого исходного материала.
Таблица показывает значительное варьирование в конопле каннабиноидов. Авторы делают вывод, что японская конопля по своей психотропной активности (содержанию изомеров ТГК) не уступает индийской, которая ценится как «первосортная»
Если хроматографировать не свободные каннабиноиды, а получаемые из них силиловые эфиры, то достигается более четкое разделение. Индивидуальные эфиры можно также гидролизовать, но для аналитических целен в этом нет необходимости.
Если условно принять за единицу количество КБД, то результаты одного опыта можно иллюстрировать следующими данными (на фрактограмме получено 12 сигналов, свидетельствующих о содержании индивидуальных соединений):
12 Вещества А, Б, В, Г не идентифицированы.
Ранее указывалось, что, по мнению Кимура и Окимото, главной составной частью каннабиноидов анализируемой ими конопли является ТГКК. Декарбоксилирование происходит якобы уже при нагревании до 110°. В этих условиях дегидрирования до КБН, наблюдаемого при более высокой температуре (например, при куреням), еще не происходит.
После кратковременной термической обработки из экстракта отбирается аликвотная часть и переносится в газовый хроматограф, где определяется только ТГК, как самая существенная часть гашиша, а расчет ведется на кислоту 'ГГ'КК.
Содержание ТГКК заметно меняется в зависимости от органов растения и сроков его вегетации. Так, в раннюю стадию роста в листьях женских особей конопли содержится больше ГТКК (1,86 %), чем в мужских (0,65 %). По мере созревания количество ТГКК в верхних листьях резко падает (до 0,12 % в женских растениях), а в метелках возрастает (до 5,62 %). Установлено, что за период созревания метелок (с 1/IХ по 30/Х) содержание ТГКК увеличивается более чем в три раза. В этой работе другие каннабиноиды не упоминаются, а также не учитываются особенности изомеров ТГК.
Приводим выдержку из прописи по анализу листьев конопли, проведенному японскими химиками. Измельченные листья в количестве 20–30 мг высушивались 1–2 дня в эксикаторе, затем нагревались в течение 15 мин при 110° в электрической приборчике с регулируемой температурой. После этого следовала трехкратная экстракция по 10 мл хлористого метилена при комнатной температуре. Экстракт переносился в колоночку с силикагелем (1x3 см) и промывался тем же растворителем. Первые 20 мл элюата испарялись в пробирке и к остатку добавляли 0,1 мл 0,57-ного спиртового раствора тетраметилдиаминодифенилметана в качестве внутреннего стандарта. 1 мл такого раствора помещался в газовый хроматограф. Время удерживания калибровалось по чистому ТГК. Без первичной термической обработки значения ТГК оказываются очень заниженными. Данные анализов, выполненных Кимура и Окамото, здесь не показаны. Считаем нужным обратить только внимание на необычайно высокое содержание ТГКК в зрелых метелках конопли (до 10 % от веса сухого растения). Другие авторы подобные результаты никогда не приводили.
Одной из новых разновидностей хроматографической техники является использование центрифугирования, позволяющего ускорить процесс разделения сложных смесей органических соединений. Петкоф с сотрудниками применили этот метод для анализа конопли и гашиша. В специальные трубочки, заполненные мелкодисперсным силикагелем, вводились образцы шести индивидуальных (синтезированных) каннабиноидов в разных количествах от 0,5 до 10 мкг. В свободное пространство заливался петролейный эфир, содержащий один процент диэтиламина.
После центрифугирования в течение 13–15 мин силикагель из трубочек выталкивался и опрыскивался 0,4 %-ным раствором «голубой соли». На хроматограммах проявлялись окрашенные зоны с различным значением Rf.
Набор таких стандартных хроматограмм, содержащих чистые КБХ, КБН, Δ1(2) ТГК, Δ1(6) КБД и КБЦ, использовался для визуального сопоставления (по ширине и интенсивности окраски полос) с хроматограммами анализируемых образцов, получаемых в тех же условиях. Экстракты готовились из тонкоизмельченной воздушно-сухой конопли и гашиша (навески от 0,1 до 5 г) трехкратным настаиванием петролейным эфиром при комнатной температуре. Объединенные вытяжки фильтровались и упаривались досуха в токе азота. Экстракты растворялись в циклогексане так, чтобы в 1 мл раствора содержалось от 30 до 40 мг твердого остатка и сохранялись при 0° до использования.
Практически можно достоверно определять каннабиноиды, содержащиеся в экстрактах в значительных количествах. Минорные компоненты в лучшем случае удавалось оценить лишь качественно.
Мы приводим результаты анализа двух случайных образцов из числа других, вы полненных авторами:
Изомер Δ1(6) ТГК не был обнаружен ни в одном образце природного происхождения. Это согласуется с данными Гаони и Мехулэмам, установивших, что в конопле Δ1(6) ТГК содержится в минимальных количествах в сравнении с Δ1(2) ТГК.
Хроматография в сочетании с центрифугированием была применена теми же авторами для анализа конденсата гашишного дыма, получаемого из синтетического дК2) Оказалось, что только 60 % исходного Δ1(2)) ТГК сохраняется в неизменном виде. Остальные 40 % превращаются в КБН.
Завершая обзор аналитических методов, отметим, что все они не в полной мере отвечают требованиям. Одни не столь чувствительны, чтобы обнаруживать все каннабиноиды, включая минорные соединения и изомеры (бумажная и ТСХ). Другие проводятся в условиях, вызывающих образование вторичных продуктов (ГЖХ).
Однако если предварительно очищенный петролейноэфирный экстракт пропустить через колонку с силикагелем, импрегнированным азотнокислым серебром (элюирование бензолом), то удается разделить и изомеры Δ1(2)) и Δ1(6) ТГК [36].
При многократном хроматографировании на бумаге или на колонке неминуемы потери и образование вторичных продуктов. Как правило, здесь определяются только главные компоненты, тогда как фенолокислоты и минорные вещества не учитываются. Вместе с тем, как выше было показано, ТГКК м КБДК преобладают в смеси каннабиноидов.
Метод противоточного распределения впервые был применен для разделения фенольных компонентов гашиша немецкими химиками Клауссспом, Спулаком и Кортэ. Весь процесс проходит при комнатной температуре без воздействия агрессивных реагентов, поэтому сведены к минимуму все возможные вторичные процессы (изомеризации, декарбоксилирование, окисление).
Экстракт гашиша, предварительно очищенный от окрашенных и смолистых примесей с помощью дезактивированной окиси алюминия, подвергался противоточному распределению но Кренгу в системе лигроин-метанол-вода-диметилформамид (10::8:2:1). При этом в кристаллическом виде были выделены КБД, КБП, КБХ и в виде масла ТГК. Небольшое количество ТГКК также удалось получить при повторном распределении. ТГК имел [α]D —193°, то есть среднее между значениями [α]D для Δ1(2) ТГК и Δ1(6) ТГК. По-видимому, удельное вращение может служить показателем соотношения изомеров ТГК в анализируемых образцах гашиша.
5. Выделение индивидуальных каннабиноидов из гашиша.
Потребность в чистых фенольных соединениях конопли определяется поставленными задачами. На первом этапе изучения химии гашиша они нужны были для установления строения, изучения превращений и получения производных. Эта задача практически почти решена, остались только отдельные вопросы, связанные с расшифровкой стереохимических особенностей структуры каннабиноидов.
Некоторое количество индивидуальных соединений постоянно требуется при про ведении анализов в качестве метчиков (свидетелей) хроматографии, построения калибровочных кривых и контрольных определений. В этой связи наборы
